PROCEDIMIENTOS EN GENERAL
Las células para exámenes citológicos se obtienen por • Frotis de superficies mucosas
• Frotis de secreciones en un portaobjetos de vidrio
• Centrifugación de fluidos corporales (efusión o líquido de quistes, orina, líquido cefalorraquídeo, etc.)
• Raspado de tejido fresco
• Aspiración con aguja fina de cualquier órgano
1. Tomar frotis de los genitales femeninos La mayoría de los frotis de la mucosa se toman del cuello uterino y la vagina: se inserta espéculo de toma vagina, de modo que el cuello uterino pueda estar representado el cristal.
• El material celular debe ser untado uniformemente en una dirección.
• Los frotis deben fijarse inmediatamente con spray o, mejor aún, por inmersión en etanol desnaturalizado al 96 %, como se describe a continuación.
Figura 1: Técnicas de toma de células de la mucosa del cuello uterino:
a con una espátula, b con un citocepillo; c aspiración de células endometriales con una pipeta de globo.
2. Toma de frotis de otras superficies mucosas
Principalmente, la técnica de obtener células de otros sitios mucosos como la cavidad oral sigue las mismas reglas. También se hacen con espátula o con brocha. Lo más importante nuevamente: nunca use un hisopo de algodón.
El cepillado es el mejor método para obtener frotis de mucosas traqueobronquiales o intestinales en procedimientos endoscópicos. Los frotis deben fijarse inmediatamente.
Métodos "Fijación, Técnicas”. Dependiendo de la situación, puede ser necesario que una segunda persona asistente realice la fijación durante el procedimiento endoscópico; esto garantiza especímenes profesionales y ahorra tiempo.
3. Manchas de secreciones Figura 2: Secreción bronquial, viscosa con vetas parduscas (izquierda) y saliva acuosa con finos agregados celulares blanquecinos (placa Petri derecha)
Se toma una gota de la secreción pardusca (a la izquierda en la fig. 2) con pinzas y se coloca en un portaobjetos de vidrio. En el caso de una secreción muy viscosa, la gota puede separarse con unas tijeras para uñas. El esputo y las secreciones bronquiales se tratan principalmente de la misma manera.
Esputo Consta de diferentes componentes, es decir, de saliva acuosa de la cavidad oral y de una secreción bronquial más viscosa. El epitelio escamoso de la boca a menudo aparece como gránulos blanquecinos finos, mientras que la secreción bronquial puede contener vetas parduscas. Los gránulos blanquecinos de la saliva no deben seleccionarse para el examen citológico, sino las rayas parduscas del material viscoso, que corresponden a macrófagos alveolares o sangre y son más indicativas de un proceso patológico.
4. Preparación de grandes volúmenes de fluidos (efusiones, fluidos de lavado)
Los mejores resultados se obtienen si se cumplen las siguientes reglas: • Si es posible, todo el líquido obtenido debe enviarse al laboratorio. • Como los fluidos serosos contienen suficientes proteínas y otras sustancias nutritivas para las células, incluso a temperatura ambiente, las células se conservan durante algunas horas y se pueden conservar a 4°C durante 24 – 48 horas en el frigorífico sin aditivo. Tampoco agregue un anticoagulante (heparina). • Si es posible, se debe centrifugar todo el líquido. No decantar una pequeña porción del pinchado, especialmente si no se ha movido durante un tiempo. Es posible que las células hayan tenido tiempo de hundirse hasta el fondo del recipiente. • En el caso de un gran volumen de fluido la centrifugación se realiza en dos pasos: Primero utilizando tubos de tamaño adecuado. Tiempo de centrifugación 10 min a 2500 rpm. • Para la segunda centrifugación, los sedimentos de la primera centrifugación se mezclan, se transfieren a un tubo de 10 ml y se llenan con algo de sobrenadante de la primera centrifugación. Tiempo de centrifugación 10 min a 2500 rpm. • El sedimento final debe mezclarse completamente con una varilla de vidrio o la punta de la pipeta. Luego, se coloca una gota del sedimento en cada uno de los tres portaobjetos de vidrio de adhesión (Superfrost®). Si el gránulo es grueso y muestra capas de diferentes colores, se pueden tomar cuidadosamente las gotas de cada capa por separado. Las células tumorales están contenidas en su mayoría en una capa blanquecina. • Inmediatamente después, la gota de cada portaobjetos se esparce (unta) con otro portaobjetos colocándolo en cruz sobre cada uno. Se fijan dos frotis por inmersión inmediata en etanol 96% o solución de Delauney y luego se tiñen con tinción de Papanicolaou (fig. 4F); el tercero puede teñirse al aire, luego fijarse con metanol y teñirse con MGG.
Nota: Si se prevé la tinción de Papanicolaou, evite el secado de las células. Por lo tanto, frotis tras frotis deben manejarse por separado de esta manera, algunos casos, una gran cantidad de fibrina se intercala en el sedimento, de modo que las células tumorales pueden ser capturadas en la fibrina y no contenidas en su parte líquida. Luego, el gránulo debe triturarse completamente con una varilla de vidrio antes de aspirar el líquido. Sin embargo, a veces puede ser necesario incluir el coágulo de fibrina en parafina y realizar más estudios para el examen histológico.
5. Centrifugación de pequeños volúmenes de fluidos Fluidos oligocelulares
Se recomienda la citocentrifugación para obtener muestras de celularidad adecuada de cualquier volumen de líquido pequeño y líquidos que contengan en su mayoría solo unas pocas células, como el líquido cefalorraquídeo, la orina y los líquidos que contienen aspirados con aguja fina. En general, estos fluidos también deben centrifugarse dos veces: la primera centrifugación debe comprender todo el volumen de fluido para obtener la mayor cantidad de células posible. El sedimento de la primera centrifugación se procesa con la citocentrifuga.
Si van a trabajar sedimentos muy celulares con este método, que no recomendamos como procedimiento estándar, el sedimento debe fraccionarse en porciones adecuadas para obtener muestras sin demasiadas células. El objetivo es una monocapa de células. Eso, sin embargo, requiere algo de experiencia y solo puede ser razonable si se espera una gran cantidad de células patológicas. Una cámara del aparato contiene de 0,25 a un máximo de 0,30 ml. Coloque los portaobjetos y los filtros en las ranuras correspondientes del cytospin con los filtros de cartón hacia el centro del cytospin. Asegúrese de que cada par de filtro y portaobjetos quede nivelado entre sí, y que el orificio del filtro esté en la posición adecuada para que las células puedan alcanzar el portaobjetos. Una centrifugación de 2-5 min a un máximo de 800 rpm es suficiente para liquidos de medula osea. Durante el centrifugado, es imprescindible permanecer junto a la máquina y esperar a que se detenga, para que inmediatamente se puedan sacar los portaobjetos y fijarlos con spray. No se recomienda la fijación por inmersión en fijador alcohólico para evitar el desprendimiento de las células. Aunque la fijación por secado al aire es más simple, está contraindicada para muestras de orina y menos útil para preparaciones de efusiones y aspirados con aguja fina, especialmente si seguirá una consulta telemédica y/o pruebas inmunocitoquímicas. Además, si las células no están bien conservadas, aumentarán los artefactos de secado, lo que puede comprometer la evaluación citológica o incluso imposibilitarla. Una desventaja menor del método de citocentrifugación es que las células pequeñas, especialmente los linfocitos, son succionadas por el filtro más rápidamente que las células grandes; esto puede falsear las proporciones relativas de tipos de células contenidas en el líquido. En lavados broncoalveolares, esto es de particular importancia. En tales casos, se recomiendan frotis regulares de centrifugación clásica.
6. Preparación de lavados de orina y vejiga.
La “segunda” orina de la mañana es apropiada para el análisis citológico ya que las células de la “primera” orina suelen estar más dañadas por la autólisis. Para la centrifugación y preparación de lavados de orina y vejiga se deben seguir las mismas reglas que para la centrifugación de fluidos de efusión. Como la orina "normal" generalmente contiene unas pocas células, la segunda centrifugación se realiza mejor con la citocentrífuga. Sin embargo, el método de centrifugación de elección depende de la cantidad de sedimento de la primera centrifugación. La tinción de Pap es la tinción recomendada para fluidos urológicos, no la tinción de Romanowski como la de May-Grünwald-Giemsa (MGG).
Importante La orina (vaciada o ganada por cateterismo) y los lavados vesicales deben enviarse al laboratorio enteros, mezclados con un volumen igual de etanol desnaturalizado al 50 %, de modo que la concentración final de etanol sea del 25 %. El etanol debe agregarse después inmediatamente es la única y manera de las células durante de orinar y ganar líquido, respectivamente. Esta bacteriano conservar prevenir el crecimiento varios días, refrigeradas a 4°C. Sin agregar etanol, las células se descomponen rápidamente y las bacterias pueden crecer demasiado en el líquido en muy poco tiempo (¡1 a 2 horas!).
7. Raspados e impresiones de tejido fresco
• Se logran preparaciones especialmente teñidas raspando las células de la superficie cortada del tejido fresco justo después de que el cirujano lo haya extraído. Estos frotis de tinción rápida son una alternativa a las secciones congeladas durante la operación. • Se unta una gota de las células raspadas como de costumbre. (También es posible manchar directamente con el bisturí, pero podría resultar en manchas demasiado gruesas.
8. Preparación de frotis de sangre y médula ósea
Aspiración de médula ósea
A diferencia del material FNA, el aspirado de médula ósea tomado del esternón o de la cresta ilíaca debe frotis cuidadosamente como se muestra en la figura 6, para obtener una muestra que contenga una cantidad suficiente de células mielídicas monocapa. Después de una rápida fijación al aire mediante secado con secador y posterior fijación en metanol, el frotis se tiñe con uno de los métodos de tinción de Romanowsky, mejor con la tinción de Wright o May- Grünwald-Giemsa, que permite una representación óptima del citoplasma.
Paso 1: Poner una gota de aspirado de médula ósea en el portaobjetos de vidrio. Paso 2: Colocar el portaobjetos con un borde sobre papel secante y extraer el fluido sanguinolento.
Paso 3: Recoger algo de material de la gota original del aspirado con el borde de un segundo portaobjetos de vidrio
Paso 4: untar este material en un tercer portaobjetos presionando ligeramente el segundo en el tercer portaobjetos
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