Protocolo de Tinción PAS para Tejidos: Una Guía Completa

La tinción con ácido peryódico de Schiff (PAS, por sus siglas en inglés) es una técnica histológica comúnmente utilizada para visualizar componentes específicos de los tejidos, como los polisacáridos y mucinas, que reaccionan con el reactivo de Schiff para producir un color magenta. Este método es especialmente útil en la identificación de glicógeno, mucinas neutras y membranas basales. En este blog, exploraremos paso a paso cómo realizar un protocolo de tinción PAS para tejidos.

Materiales y Reactivos

Antes de comenzar, asegúrate de tener todos los materiales y reactivos necesarios:

Materiales

• Portaobjetos con cortes de tejido fijados

• Gradillas para portaobjetos

• Bañera de tinción

• Microscopio

• Guantes y bata de laboratorio

Reactivos

• Solución de ácido periódico al 0.5%

• Reactivo de Schiff

• Solución de hematoxilina de Harris (opcional, para contratinción)

• Solución de amoníaco o agua de Scott (para diferenciar la hematoxilina)

• Alcohol etílico (diferentes concentraciones)

• Xileno

• Agua destilada

• Bálsamo de montaje y cubreobjetos

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Protocolo de Tinción PAS

1. Preparación de los Portaobjetos

Asegúrate de que los cortes de tejido están adecuadamente fijados y desparafinados. Para tejidos embebidos en parafina:

1. Desparafina los cortes en xileno (2 cambios de 5 minutos cada uno).

2. Rehidrata pasando los cortes a través de una serie de alcoholes decrecientes (100%, 95%, 70%) durante 2-3 minutos en cada concentración.

3. Lávalos en agua destilada durante 5 minutos para completar la rehidratación.

2. Oxidación

1. Incuba los portaobjetos en la solución de ácido periódico al 0.5% durante 5-10 minutos. Esto oxida los grupos glicólicos en aldehídos.

2. Lava los portaobjetos en agua destilada durante 2-3 minutos.

3. Reactivo de Schiff

1. Sumerge los portaobjetos en el reactivo de Schiff durante 15 minutos. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para formar un color magenta.

2. Lava en agua corriente durante 5-10 minutos hasta que el color magenta sea claro y estable.

4. Contratinción (Opcional)

1. Si deseas realizar una contratinción, sumerge los portaobjetos en hematoxilina de Harris durante 1-2 minutos.

2. Enjuaga en agua corriente durante 5 minutos.

3. Diferencia en solución de amoníaco o agua de Scott durante 30 segundos a 1 minuto.

4. Lava nuevamente en agua corriente durante 5 minutos.

5. Deshidratación y Montaje

1. Deshidrata los cortes pasando los portaobjetos a través de una serie de alcoholes crecientes (70%, 95%, 100%) durante 2-3 minutos en cada concentración.

2. Aclara los portaobjetos en xileno (2 cambios de 5 minutos cada uno).

3. Monta con bálsamo de montaje y coloca un cubreobjetos.

6. Observación

Deja secar los portaobjetos y obsérvalos bajo el microscopio. Los componentes positivos para PAS aparecerán en magenta brillante, mientras que los núcleos teñidos con hematoxilina (si se realizó la contratinción) aparecerán en azul.

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Conclusión

La tinción PAS es una técnica esencial en el campo de la histología y patología, proporcionando información valiosa sobre la composición y estructura de los tejidos. Siguiendo este protocolo, puedes realizar tinciones PAS de manera efectiva y precisa. Recuerda siempre trabajar con cuidado y seguir las normas de seguridad del laboratorio.

Esperamos que esta guía te haya sido útil. ¡Feliz tinción!

Referencias

• Bancroft, J. D., & Gamble, M. (2008). Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone Elsevier.

• Luna, L. G. (1968). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. McGraw-Hill.

• Kiernan, J. A. (1999). Histological and Histochemical Methods: Theory and Practice. Butterworth-Heinemann.