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Técnicas de Detección de VPH moleculares en los laboratorios de Perú

By Jessyca Gutierrez

- Hybrid Capture 2 (HC2). Es un método semicuantitativo no radiactivo. Se basa en la hibridación del DNA-VPH usando sonda de RNA que se complementa a una secuencia común para 13 tipos de VPH considerados de alto riesgo (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68), que reaccionan con anticuerpos monoclonales específicos que revelaran el virus por quimioluminiscencia.

- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Es el método más sensible para la detección de VPH. Los protocolos, en su mayoría, usan juegos de oligonucleótidos dirigidos a la región del gen L1 altamente conservadora entre los tipos virales. Entre ellos destaca el uso de los oligonucleótidos GP5+/6+ y los MY09/11 degenerados. Para la tipificación de genotipos virales a partir de los productos de la amplificación, se utilizan distintos métodos Southern Blot, Hibridación Dot Blot, fragmentos de restricción de longitud polimórfica (RFLP), secuenciación y enzimoinmunoensayo.

La PCR para VPH puede verse alterada por la presencia de diversas sustancias que inhiben la reacción de amplificación. Por estas razones, la mayoría de laboratorios han incorporado la amplificación de un control interno. Esto es particularmente importante para muestras de tejido conservado en parafina, donde puede haber degradación del DNA; por tanto, se recomienda evaluar previamente la integridad de la muestra.

Entre los sistemas con mayor sensibilidad para determinar la infección por VPH destaca la PCR en tiempo real. Un método muy usado en estudios epidemiológicos y clínicos que permite estimar con gran precisión la carga viral. Asimismo, existen dos sistemas fundamentados en la PCR comúnmente utilizados para la detección de los genotipos del VPH. Aunque algunos genotipos del VPH pueden producir anormalidades citológicas, no todos tienen implicancia clínica en el desarrollo de una probable lesión maligna, por ello es importante contar con la genotipificación del VPH.

COSTOS

- En laboratorio ROE el costo es de 577 soles por PCR (Genexpert)

- El HOPEVPH que promueve el ministerio de Salud tiene un costo de 155 soles.

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