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Técnicas correctas de fijación citologica

Técnicas de fijación La fijación estabiliza las células y detiene la autolisis. Una correcta fijación es fundamental para lograr una representación estandarizada de los diferentes tipos celulares. La fijación no profesional es una de las causas más frecuentes de muestras no evaluables y problemas de diagnóstico. Hoy en nuestro grupo de miembros free en whatsapp nos planteaban este problema. La elección de diversos métodos de fijación depende de: • origen del material celular

• método de tinción proporcionado

• pregunta de diagnóstico (preguntas hematológicas/oncológicas generales) Principalmente, hay dos formas diferentes de fijación celular.


Fijación en húmedo: Las células se fijan inmediatamente después de recibirlas y se untan en el portaobjetos de vidrio. El procedimiento de frotis y fijación debe realizarse en un máximo de 5 segundos. Es recomendable dejar en el fijador (alcohol) 24h para óptimos resultados.


Fijación por secado : Necesita procesamiento posterior inmediato (utilizado principalmente para la tinción DiffQuick y MGG) FIJADORES Los fijadores más utilizados en citología son

  • Alcohol isopropilico 96 % desnaturalizado • Etanol-Metanol

  • acetona

  • El mejor fijador sin duda el citospray

La fijación con propanol es posible, pero huele mal, y los resultados con la siguiente tinción de Papanicolaou no son tan espléndidos como con citospray. Los fijadores acuosos como la formalina al 4% no son apropiados para las muestras citológicas. MODOS DE FIJACION

El método de tinción más aplicado a los frotis citológicos es la tinción de Papanicolaou. Requiere fijación húmeda. La más sencilla es la fijación de los frotis por inmersión en una cubeta o por citospray.

Importante Ambos fijadores deben almacenarse en un frasco bien cerrado; esto es especialmente importante en un clima tropical cálido y húmedo debido a la propiedad higroscópica del etanol, lo que significa su tendencia a absorber agua en forma de vapor del aire circundante. Si los frotis se envían al laboratorio después de la fijación inmediata en estado seco, deben rehidratarse antes de ingresar al banco de tinción de Papanicolaou; esto se hace a través de soluciones de etanol de concentraciones decrecientes. Para mejorar la adherencia de las células al vidrio y evitar la pérdida de células, los portaobjetos deben desengrasarse con éter o acetona. Si es posible, se deben utilizar portaobjetos especialmente preparados disponibles comercialmente ("SuperFrost®). Tambien llamadas laminas cargadas.


Figura 1: Fijación por inmersión. Después de untar el material citológico, los portaobjetos se sumergen inmediatamente en el fijador.
Figura 1: Fijación por inmersión. Después de untar el material citológico, los portaobjetos se sumergen inmediatamente en el fijador.

Si se fijan muestras de más de un paciente en el mismo recipiente, debe tenerse en cuenta el riesgo de contaminación por transposición de células de un portaobjetos a otro.

Fijación con spray Los aerosoles de fijación disponibles comercialmente contienen un componente similar a la cera, que cubre los frotis con una película protectora celular después de 20 minutos de secado. La fijación por pulverización es especialmente útil si los frotis deben enviarse a un laboratorio distante, para la fijación de preparaciones de citocentrífuga y otros frotis con baja celularidad, cuando la fijación por inmersión conduciría a una pérdida de células relativamente alta. La fijación por pulverización también exige un flujo de trabajo rápido . Los frotis no deben secarse en ningún momento antes de ser pulverizados. Por lo tanto, la botella de spray debe estar lista para usar, antes de que comience cualquier procedimiento de obtención de células. En el caso de tomar frotis cervicales o aspiraciones con aguja fina una persona puede tomar o preparar los frotis y la otra aplica el fijador (fig. 2).


Figura 2: Fijación por pulverización
Figura 2: Fijación por pulverización

Fijación de frotis de aspirados con aguja fina La Figura 3 demuestra cómo se deben preparar varios frotis de muestras como el sedimento de fluidos centrifugados o los obtenidos por FNA.

Figura 3: Preparación rápida de varios frotis a partir de la misma muestra celular, en este caso a partir de un aspirado con aguja fina.
Figura 3: Preparación rápida de varios frotis a partir de la misma muestra celular, en este caso a partir de un aspirado con aguja fina.

Importante Para evitar artefactos de secado, la fijación de cada frotis debe realizarse inmediatamente después del frotis. Por lo tanto, cada diapositiva debe prepararse por separado. Sin embargo, la gota "sin manchas" es estable durante un máximo de 3 minutos.



Fijación por secado al aire En general, los frotis de sangre o aspirados de médula ósea se secan al aire y se tiñen inmediatamente con una variante de la tinción de Romanowsky. También es posible fijarlos por inmersión en metanol si no se tiñen directamente. El efecto previsto del secado al aire es la difusión del citoplasma en el portaobjetos, lo que proporciona una mejor visualización de los orgánulos citoplasmáticos en las tinciones de Romanowsky.


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